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    南京信帆生物:免疫組化之二步法介紹
    更新時間:2016-04-26   點擊次數:1416次

    二步法:EnVision System

    EnVision顯色系統是將二抗和酶通過一個多聚葡聚糖骨架聯接成一個多聚體(即 EnVision)直接放大信號40-50倍,把傳統的二抗、三抗分別孵育合為一次孵育。特點:敏感、省時、方便、背景低(避免了內源性生物素干擾)。

    EnVision工作程序:

    1) 脫蠟、水化組織切片。
    2) 預處理組織切片(據一抗具體說明而定)
    3) 蒸餾水漂洗,置于TBS中。
    4) 阻斷內源性過氧化物酶(僅用于EnVisionTM/HRP)
    5) 蒸餾水漂洗,置于TBS,10分鐘
    6) 一抗孵育10-30分鐘
    7) TBS漂洗10分鐘
    8) EnVisionTM孵育10-30分鐘
    9) TBS漂洗10分鐘
    10) 色源底物溶液孵育10分鐘
    11) 蒸餾水漂洗
    12) 復染及封片

    免疫染色方法
    The basic principles of ICC
    • 抗原抗體反應
    • 標記化學反應
    • 呈色化學反應
    要求
    待檢標本形態結構
    和抗原性保存良好,
    抗原不從原位擴散
    或丟失

    Specimen preparation
    取材新鮮,固定及時,形態保存完好,抗原物質的抗原性不丟失、不擴散和被破壞
    • Fixation
    • Sample Type
    Cryostat (frozen) sections
    Paraffin Sections
    Antigen Retrieval Techniques
    • Intention: To facilitate the immunological reaction of antibodies with antigens (increase reactivity of the majority of antigens) .
    Antibody Staining
    • Primary antibody may be directly labeled
    • labeled secondary antibody or more complex detection system.
    • secondary antibody against the immunoglobulins of the primary antibody source
    減少或消除非特異性染色的方法
    • zui常見原因 蛋白吸附于高電荷的膠原和結締組織成分上

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